Лабораторная диагностика лекарственной аллергии

Лекарственная аллергия – это иммунологически опосредованный ответ на фармацевтические вещества и/или лекарственную форму (вспомогательные вещества) в сенсибилизированном организме. Лекарственную аллергию могут вызывать следующие группы лекарственных средств: антибиотики (преимущественно бета-лактамная группа, фторхинолоны), нестероидные противовоспалительные средства, мышечные релаксанты, хлоргексидин, инсулины животного происхождения. Наличие лекарственной аллергии затрудняет дальнейшее ведение пациента, подбор оптимального лечения, увеличивает риск возникновения тяжелых осложнений. Кроме того, следует отметить значительные финансовые затраты, необходимые для лечения лекарственной аллергии, увеличение сроков пребывания пациентов в стационаре и периода временной нетрудоспособности.

В настоящее время в Республике Беларусь диагностика аллергических проявлений на лекарственные средства базируется преимущественно на анамнезе заболевания, то есть ограничивается тем, насколько подробно пациент сможет описать возможные причины аллергической реакции. Не смотря на то, что золотым стандартом диагностики лекарственной аллергии признаны провокационные пробы, на практике их используют крайне редко вследствие риска возникновения тяжелых системных реакций, а также наличия большого числа противопоказаний. Лабораторная диагностика включает проведение реакции дегрануляции тучных клеток (РДТК), реакции агломерации лейкоцитов (РАЛ). Однако результаты данных устаревших методов исследования крайне сомнительны и не имеют клинической значимости.

Для непосредственного определения специфического иммуноглобулина Е используются три основны метода: радиоаллергосорбентный (РАСТ), иммуноблоттинг и хемилюминесцентный метод (МАСТ). Не смотря на высокую специфичность данных методов, имеется ряд существенных недостатков, ограничивающих их использование, включая высокую стоимость наборов и узкий спектр определения лекарственных средств. Так, концентрация IgE в случае аллергии на лекарственное средство в свободном состоянии крайне низкая, поскольку IgE преимущественно связывается с высокоаффинным рецептором FceRI на поверхности базофилов и тучных клеток. Помимо этого, IgE-иммунный ответ, например, в случае аллергии на пенициллин носит транзиторный характер и менее чем у половины пациентов сохраняется в течение одного года. Следовательно, для диагностики лекарственной аллергии целесообразно использовать именно клеточные тесты.

Таким образом, совершенствование методов лабораторной in vitro диагностики IgE-опосредованной аллергии на лекарственные средства, позволяющие быстро и с высокой достоверностью получить результат, является актуальной задачей практического здравоохранения.

В последнее время интерес для аллергологов в развитых странах мира представляет тест активации базофилов (basophil activation test - BAT) в качестве клеточного теста in vitro диагностики аллергии. Данный тест был предложен в 1994 году Sainte-Laudy J. Методика основана на способности базофилов экспрессировать на своей поверхности маркеры активации и дегрануляции после инкубации с исследуемыми аллергенами при наличии у пациента сенсибилизации к ним. Маркеры, самыми значимыми из которых являются молекулы LAMP-семейства (CD63, CD107a), а также специфический маркер базофилов – молекула CD203c легко идентифицируются на поверхности клеток при помощи проточного цитометра.

К настоящему времени BAT представляет собой перспективное направление для диагностики лекарственной аллергии. Ежегодно с 2007 года проводятся международные конференции EuroBAT с целью обсуждения результатов исследования и оптимизации метода диагностики аллергии. При этом приоритетным вопросом является диагностика гиперчувствительности к антибактериальным средствам. Так, чувствительность данного метода для диагностики гиперчувствительности к беталактамным антибиотикам оценивается в среднем около 60%, специфичность – более 90%, что указывает на высокую диагностическую значимость данного метода диагностики.

Для проведения исследования к небольшому объему периферической крови пациента добавляют моноклональные антитела к молекулам CD123, CD107a, CD63 и CD203c (конъюгированных с разными флуорохромами) и а) фосфатный буферный раствор (отрицательный контроль), б) исследуемый аллерген в последовательном разведении, в) ФМА (25 нг/мл) и иономицин (1мкг/мл) в качестве положительного контроля. Для усиления чувствительности диагностики осуществляют преинкубацию проб с ИЛ-3 в течение 20 минут при 37ºС. После чего лизируют эритроциты и проводят учет результатов на проточном цитофлуориметре. На рисунке показано появление на мембране базофилов маркеров активации и дегрануляции после инкубации базофилов крови с аллергеном тимофеевки, к которому у пациента присутствует сенсибилизация.

Рисунок - Пример анализа экспрессии молекул CD203c, CD63 и CD107a с целью диагностики аллергии на тимофеевку. A - гейтирование базофилов; В - отсутствие значимой экспрессии молекул CD63 и CD107a базофилами (отрицательный контроль); С,D - высокая экспрессия молекул CD203c, CD63 и CD107a под действием аллергена (тимофеевка)

Рисунок - Экспрессия молекул CD63 и CD203c у пациентов с аллергией к антибиотикам

Сотрудниками лаборатории разработана инструкция по применению «Метод диагностики заболеваний и патологических состояний, обусловленных реакциями гиперчувствительности немедленного типа на лекарственные средства из группы противомикробных препаратов для системного применения» скачать


Дата изменения 2017.12.06





Использование материалов сайта возможно исключительно с письменного разрешения авторов. При цитировании обязательна ссылка на сайт.